山东省流行性出血热病人与宿主动物血清学分型及其意义的研究
　　中国人兽共患病杂志 1999年第2期5卷 实验研究
　　作者：杨占清　于晓敏　刘运喜　吴钦水　王锦凤
　　单位：杨占清　于晓敏　刘运喜　吴钦水　济南军区军事医学研究所(济南,250014)；王锦凤　济南军区总医院
　　关键词： EHF；病毒抗原；血清学分型；流行病学意义
　　摘　要　目的　为了查明流行性出血热（EHF）病人血清型与宿主动物血清型关系，探讨血清学演变及其意义。方法　采用IFA、HI和RPHI法分型。结果　在458例病人中，存在家鼠型、野鼠型和未定型病人，分别占91.48％、7.21％和1.31％。同时检测鼠肺，其中家鼠EHF病毒（EHFV）抗原阳性率为6.58％（16／243），病毒抗原型均为家鼠型。野鼠4份阴性；在鼠血清中，家鼠血清EHF抗体阳性率为10.71％（44／411），血清型为家鼠型，野鼠阳性率为4.17％（3／48），血清型为野鼠型。结论　证实当地是以家鼠型为主的家、野鼠型混合型疫区，EHFV抗原型和血清型别均与宿主动物种类相一致。
STUDY ON SEROTY PING OF PATIENTS AND HOSTS WITH EPIDEMIC
　　Hemorrhagic Fever Virus and its Significance in Shandong
Yang Zhanqing　Yu Xiaomin　Liu Yunxi　et al
　　(Military Medical Research Institute of Jinan Command，Jinan 250014)
　　ABSTRACT　Aim　To study the relationship between serotype of patients and host with epidemic hemorrhagic fever virus（EHFV）and its significance.Methods　Samples were detected by immunofluorescence assay or hemagglutination inhibition or reverse passive hemmagglutination inhibition.Results In 458 cases，housemouse type（HT）（91.48％），fieldmouse type（FT）（7.21％），unclassified（1.31％）cases coexist in the area.and in lungs of mice detected，positive rate of EHFV antigen were for 6.58％（16／243）among housemouse，serotype were HT，4 lungs of fieldmouse were negative.In sera of mice，positive rate of antibodies is for 10.71％（44／411）among housemouse，serotype is HT，and that is for 4.17％ in fieldmouse，serotype is FT.Conclusion The area is an epidemic area mixed with housemouse and fieldmouse type，mainly occupied by the housemouse type.The type of EHFV antigen and antibodies are both accordant with their host type.
　　KEY WORDS　EHF Virus antigen Serotyping Epidemiologic significance.
　　山东省是EHF重点疫区之一，近年来疫区不断扩大，病例数剧增，居全国之首，已成为危害军民健康的主要传染病，并认定褐家鼠和黑线姬鼠为主要传染源［1］。为查明EHF病人血清型与宿主动物血清型的关系，探讨血清型演变及其意义，1988年以来，我们对山东省EHF病人和主要宿主进行了血清学分型的研究，现将结果报告如下。
　　1　材料与方法
　　1.1　调查点选择　选择EHF重点疫区的临沂、济宁、泰安、济南、淄博和潍坊等地为研究现场。分别对各调查点近两年内临床确诊并经血清学证实的EHF恢复期或现症病人填写流行病学调查卡，收集临床资料，整理分析。
　　1.2　病人血清来源　从各调查点收集恢复期和现症病人血清，经IFA检测EHF抗体阳性者，再进行血清学分型。
　　 1.3　鼠肺和血清来源　从调查点室内外捕获鼠类，无菌取鼠肺组织放塑料袋内，置液氮罐保存待检。同时用滤纸片法采鼠全血［2］，作EHF抗体检测。
　　1.4　EHFV抗原和抗体检测　 检测鼠肺EHFV抗原和EHF病人血清及鼠血清抗体采用IFA技术［3］。抗鼠IgG荧光抗体和抗人IgG荧光抗体分别由军事医学科学院五所和上海生物制品研究所提供，后者批号为870301。
　　1.5　分型方法　EHFV抗原分型用IFA技术［3］，家鼠型和野鼠型单克隆荧光抗体由第四军医大学微生物学教研室惠赠。EHF病人血清和鼠血清分型分别采用HI和RPHI，操作分别按文献［4］和说明书进行。所用A-血凝素抗原和R-血凝素抗原与RPHI成套试剂均购于中国医学科学院基础医学研究所。结果判定标准为被检血清HI抗体相等或R＞A时，判为家鼠型；A＞R2～4倍以上为野鼠型；A＞R2倍以下为未定型。
　　2　结果
　　2.1　不同血清型的比例　在检测458例EHF病人血清中，检出家鼠型419例，占91.48％，野鼠型33例，占7.21％，未定型6例，占1.31％，其中以家鼠型占十分优势。
　　2.2　流行病学特征
　　2.2.1　发病时间分布　两型病人在全年各自均有发生，但发病高峰家鼠型为3月～6月，野鼠型为11月～翌年2月，分别占全年同型病人总数的65.14％和61.29％。
　　2.2.2　地区分布　在调查的6个地区中，济南和淄博市病例全部为家鼠型，其他4个地区存在野鼠型病人，但仍均以家鼠型病例居多，分别占86％～97％。
　　2.2.3　性别与年龄分布　据428例EHF病人统计，男性264例，女性164例，男、女之比为1.61∶1，其中家鼠型男、女之比为1.52∶1（237／156），野鼠型为2.88∶1（23／8），男女间无明显差别（P＞0.05），未定型4例均为男性。病人较小8岁，很大77岁，各血清型病人各年龄组均有感染，其中以30岁组和20岁组占比重较大，分别占22.43％和21.73％，但年龄分布无显著性差别（P＞0.05）。
　　2.2.4　职业分布　各血清型病人均以农民发病较多，占88.79％（380／428），其次为家住农村的学生占6.31％(27／428）和工人占4.21％（18／428），以及教师（1／428）和干部（2／428）。
　　2.3　临床特征　各血清型病人的临床症状、体征，除出血点野鼠型明显多于家鼠型（P＜0.01），而球结膜充血和五期经过不全家鼠型多于野鼠型（P＜0.01）外，其他特征基本相似。
　　2.4　鼠种组成及其带毒动物分布　本次野外捕获鼠类3种计365只，其中黑线姬鼠210只，占57.63％，大仓鼠135只，占36.99％，背纹仓鼠20只，占5.48％；室内捕鼠2种计511只，其中褐家鼠453只，占88.65％，小家鼠58只，占11.35％。可见驻地室内和野外分别以褐家鼠和黑线姬鼠为优势鼠种。从黑线姬鼠、大仓鼠、褐家鼠、小家鼠、黄鼬、家兔、猪和羊等8种动物检出EHFV抗原，分布于6个驻地，较多的一个地区达7种。
　　2.5　鼠肺EHFV抗原阳性率与分型结果　在247份鼠肺标本中，家鼠肺（褐家鼠和小家鼠）243份，野鼠肺（黑线姬鼠）4份。家鼠阳性率为6.58％（16／243），其中济南和莒南县阳性率分别为6.67％（8／120）和6.50％（8／123），抗原分型均为家鼠型；野鼠4份阴性。
　　 2.6　鼠血清抗体阳性率与分型结果　在459份鼠血清中，家鼠（褐家鼠和小家鼠）血清411份，野鼠（黑线姬鼠和大仓鼠）血清148份，家鼠抗体阳性率10.71％（44／411），其中济南市和莒南县阳性率分别为11.27％（16／142）和10.41％（28／269），血清分型皆为家鼠型；野鼠阳性2份，阳性率为4.17％（2／48），血清分型为野鼠型。
　　3　讨　论
　　本次对6个地区EHF重点疫区调查，从8种动物肺检出自然携带EHFV抗原，结合当地报道4种［5，6］，共发现12种动物带毒，多为啮齿类动物，显示当地EHF疫区呈多宿主性。各地室内和野外分别以褐家鼠和黑线姬鼠占优势，带毒以二者为高，前者带毒高于后者。当地褐家鼠密度全年各月均保持在较高水平，黑线姬鼠季节消长与EHF发病相一致［7］，进一步证实褐家鼠和黑线姬鼠是驻地疫区的主要传染源，褐家鼠的作用尤大于黑线姬鼠。并从猪、羊、家兔等检出EHFV抗原，表明宿主动物有由野生动物向经济动物扩散趋势。
　　自1984年Tsai等［8］首先应用HI检测EHFV以来，严玉辰等［4］将HI用于EHF病人血清分型，能成功地区分家鼠型和野鼠型病人。本次对EHF病人和主要宿主血清学分型结果表明，山东省存在家鼠型、野鼠型和未定型，其中90％以上为家鼠型病人，各地均以家鼠型为主。不论是城市还是农村，EHFV抗原型别和血清型别均以宿主动物种类相一致，即家鼠EHFV抗原型别和血清型均为家鼠型，野鼠血清型为野鼠型。说明宿主动物EHFV抗原型和血清型与疫区EHF病人血清型相吻合。结合我们对疫区EHF危险因素和传播方式的研究及宿主动物带毒调查结果［1，9］，显示山东EHF疫区家鼠型病人是由家鼠（主要是褐家鼠）感染的，野鼠型病人是由野鼠（主要是黑线姬鼠）感染的。而且近年山东疫区的扩大和病例剧增主要是家鼠型病毒感染所致。
　　依据本次血清学分型进行流行病学和临床特征分析，无论是家鼠型还是野鼠型临床特征基本相似。因此，采用特异性检测技术开展EHF血清学分型，对区分EHF疫源地型别，指导疫区灭鼠及疫苗预防等均有一定的实用价值。
　　4.参考文献
　　1.杨占清，于晓敏，沈承宝，等.山东EHF宿主动物的调查. 预防医学杂志，1989，7（3）：290.
　　2.徐志凯，汪美先，王海涛，等.McAb-ELISA间接夹心法检测家鼠型HFRS疫区人和动物血清中特异性抗体.第四军医大学学报，1988，5（3）：178.
　　3.张云，赵学忠，沈建中，等.流行性出血热疫区鼠、螨带毒调查.中华流行病学杂志，1986，7（3）：26.
　　4.严玉辰，贾克丽，刘国敏，等.血凝抑制试验用于EHF病人血清分型.中华流行病学杂志，1986，7（3）：135.
　　5.王育尧.淄博市EHF宿主动物调查.山东卫生防疫，1987，（4）：5.
　　6.单庆祝.曲阜市发现携带EHFV抗原的调查报告.中华流行病学杂志，1987，8（2）：113.
　　7.杨占清，于晓敏，孟祥瑞，等.应用A-血凝素抗原与R-血凝素抗原进行EHF疫区分型的探讨.中国公共卫生学报，1990，9（4）：208.
　　8.Tsai TF，et al.Hemagglutination inhibiting antibody in hemorrhagic fever with renal syndrome.J Infect Dis，1984，150（6）：895.
　　9.周进平，孟祥瑞，杨占清，等.山东莒南县EHF危险因素及传播途径的病例对照研究. 预防医学杂志，1992，10（2）：93.
1998年3月27日收稿